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同志有马新七等人因早已投入更加激进的尊王攘夷运动，正在策划乘岛津久光进京之际袭击佐幕派公卿。
大久保利通为达到自己的目的，在派人劝说无效后，断然派兵杀死有马新七等人，是为“寺田屋事件”
。
此事件造成公武合体派和尊王攘夷派的完全分裂，并加速了公武合体运动的进程。
朝廷颁布敕命。
基本满足了岛津久光的要求并宣布要改革幕政。
1864年初，作为公武合体运动结晶的雄藩会议筹备就绪，设置了德川庆喜、岛津久光等六人组成的“参与会议”
，在天皇主持下讨论国策。
然而，因各雄藩各怀私心，政见不同，德川庆喜则梦想幕府重新独揽大权，不到三个月，“参与会议”
便因六参议的相继辞职而烟消云散。
公武合体运动遭受重大挫折。
而尊王攘夷运动在一度沉寂之后。
重新高涨起来。
1865年初，另一雄藩长州的藩政权回到尊王攘夷派木户孝允、高杉晋作等人手中，长州开始实行倒幕割据政策。
幕府策划第二次征讨长州。
本来萨摩曾在禁门之变、第一次征讨长州的战争中多次与长州兵戎相见，这时却因长州通过萨摩购买英国武器而逐渐与之接近。
大久保利通早年即有“一国割据”
思想，此时看到它以另一种形式在长州实现。
便逐渐转变为倒幕派。
1866年2月，萨长两藩在坂本龙马、中冈慎太郎的斡旋下，结成了倒幕同盟，萨摩藩与德川庆喜的友好关系从此中断。
为确保倒幕成功，大久保利通与朝廷公卿岩仓具视合作，利用天皇权威，于1868年1月3日成功发动宫廷政变。
朝廷发布的“王政复古大号令”
。
废除了朝廷的摄政、关白制度与幕府的征夷大将军。
随后朝廷的军队击败进至京都郊外的幕府军队，在此后的戊辰战争中消灭了幕府。
大久保利通则担任参谋后又任总裁局顾问处理内务，协助西乡指挥作战，从而建立并巩固了明治新政权。
以天皇为首的朝廷在倒幕过程中的微妙作用。
给大久保利通以很深的印象。
他断定，为了领导日该国，天皇必须首先“一新”
朝廷之旧弊，为此就必须使天皇与象征旧弊的京都割断联系。
创造适应新时代的天皇性格。
明治政府成立后的迁都、改元等都反映了他这种思想。
明治政府在彻底消灭幕府势力后，大久保利通先担任新政府的参议。
又于1871年6月任大藏卿。
1871年4月，岩仓具视使团出访欧美，大久保利通亦随行。
在巡访中，普鲁士的“铁血宰相”
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